フローサイトメトリの新しい試薬1
PNHのフローサイトメトリ検査では、細胞表面上のGPIアンカー型蛋白のアンカー部分と特異的に結合する遺伝子組換えアエロリジンと呼ばれる蛍光細菌蛋白を利用する新しい方法が多く使われ始めています。この新しい試薬FLAER（フレア、fluorescent-labeled
inactive toxin aerolysin）は、細胞表面上にGPIアンカー型蛋白が発現している場合に限って、その細胞に結合します2。
- GPIアンカーを介して細胞表面に結合するすべての蛋白の検出に役立ちます
- GPIアンカーおよび蛋白（たとえばCD59）を欠損している細胞は、PNH血球またはPNHクローンとして認識されます
- この検査での陰性細胞比率は、CD59およびCD24などのGPIアンカー型蛋白を発現しない細胞比率と良好に相関します
PNH顆粒球の特定
- FLAER染色はPNH顆粒球の特定に有用ですが、PNH赤血球の特定には有用ではありません。したがってFLAERはPNH赤血球の検出には適当ではありません3
PNH患者さんにフローサイトメトリ検査を行うことを推奨します
フローサイトメトリによって赤血球および顆粒球におけるGPIアンカー型蛋白の発現低下を証明することが、PNHクローンの有無を確認する標準的な診断検査となりました。利用可能であれば、赤血球および顆粒球の定量的フローサイトメトリの実施を強く推奨します。AA、MDSまたは原因不明の血球減少の患者さんでは、PNHの存在を確認するために、骨髄穿刺液に加え、末梢血を用いて高感度フローサイトメトリを実施してください。
末梢血を用いてフローサイトメトリを実施するにあたり、赤血球および顆粒球の両方の細胞表面上のGPIアンカー型蛋白の定量を行う必要があります。
最も多く使用される抗体には、以下のものがあります：
- CD59
- CD55
- 白血球については、その他のGPIアンカー型抗原（CD14、CD16、CD24）でも検査が可能です
PNHクローンサイズが1%以上であれば、臨床医はPNHを疑う必要があります。正常ドナー細胞の結果に基づいた、陽性と判定する検査結果の閾値は、検査機関によって異なります。通常、正常細胞の平均値に、少なくとも標準偏差を加えたカットオフ値が陽性の下限として選択されます。しかし、検査結果が既定のカットオフ値をわずかに上回っていても、実際にはPNHクローン陽性ではない場合があり、検査結果が偽陽性である可能性を否定するために、分析を再度実施する必要があります。PNH細胞を特定する専門技術を持つ検査機関における一般的な閾値は1%です。
正常なヒストグラムとPNHヒストグラムの比較4†
†Richards et al, 2000より引用
図(a) すべての赤血球が正常赤血球（タイプI)である健常人での赤血球分布
図(b) 正常型赤血球とGPI-アンカー型蛋白を完全欠損している赤血球（タイプIII）が混在するPNH患者さんの赤血球分布
図(c) 正常型赤血球とGPI-アンカー型蛋白を部分欠損している赤血球（タイプII）が混在するPNH患者さんの赤血球分布
図(d) 3つのタイプすべての赤血球が混在するPNH患者さんの赤血球分布4
