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フローサイトメトリは、末梢血を用いるPNHの簡便かつ標準的な診断検査法です

フローサイトメトリ：PNHの診断に最も鋭敏な検査法であり、有用な情報を提供します

PNHの標準的な診断検査法フローサイトメトリは、PNHクローンの検出において最も安定性があり、鋭敏です。この検査方法は、PNHクローンを検出し、感度および特異性が優れているため、Ham試験やシュガーウォーター試験など、従来の検査方法に代わって広く行われるようになりました^1-3。

• GPIアンカー型蛋白質（CD59とCD55）に対するモノクローナル抗体またはFLAER（フレア、fluorescent-labeled inactive toxin aerolysin）を用いて行います^1-3。
• 赤血球のみでなく顆粒球についても、PNH血球のクローンサイズを定量的に測定する必要があります²
  • 溶血による影響や赤血球輸血による希釈効果のため、赤血球のみでは、正確なクローンサイズを得られないことがあります
• 顆粒球および赤血球の両方を検査します
  • 溶血や輸血による希釈効果により、赤血球単独では不十分と考えられます
• 血液サンプルは、高感度フローサイトメトリ（0.01％以下のPNHクローンを検出できる）を実施する検査室/検査センターに送付して測定します
• フローサイトメトリは非侵襲性の検査です

フローサイトメトリを使用したPNHクローンの検出

この検査は、血液細胞表面上のGPIアンカー型蛋白質（CD59など）に対するモノクローナル抗体、またはGPIアンカーを認識するように蛍光ラベルした細菌蛋白；FLAER（フレア、fluorescent-labeled inactive toxin aerolysin）のいずれかを使用します。ときに、結果の正確性および再現性を担保するため、数種類の抗体を使用することがあります。

モノクローナル抗体

• それぞれの抗体は特定のGPIアンカー型蛋白質に結合します⁴
• PNH赤血球およびPNH顆粒球を同定します

赤血球検査

• PNH赤血球は最も簡単に分析できますが、終末補体によって破壊されやすいため、しばしば他の血球細胞におけるPNH赤血球の割合と異なることがあります。したがって、PNH赤血球の割合はPNH造血幹細胞クローンサイズを反映しない可能性があります
• PNHの患者さんは赤血球濃厚液を受ける頻度が高く、輸血された赤血球はPNH赤血球クローンを希釈するため、実際のPNHクローンサイズを反映しない可能性がさらに高くなります

顆粒球検査

• 一部の患者さんでは、フローサイトメトリに十分な顆粒球数を得ることが困難であったり、一種類の抗体では正確な測定ができないことがあります
  • 定量の精度を確保するために、複数の抗体（たとえば、CD59、CD55、CD16、CD24およびCD66に対する抗体）を同時に使用することができます
  • 顆粒球は補体によって破壊されず、多くの患者さんが受ける頻回の赤血球輸血でも希釈されないため、顆粒球の分析によって実際のPNHクローンサイズをより正確に評価することができます